构建压力超负荷心力衰竭湿证小鼠模型及评价体系。

将C57BL/6小鼠随机分为假手术组（Sham group）、心衰组（TAC group）和心衰湿证组（TAC-D group），每组7只。假手术组只开胸不缩窄主动脉弓，心衰组采用主动脉弓缩窄术构建心衰模型，两组小鼠均饲养于正常环境；心衰湿证组除缩窄主动脉弓外，每日放置于人工恒温恒湿箱8 h进行湿证造模，其余时间饲养于正常环境，持续8周。根据《中医湿证动物模型评价量表》评估小鼠宏观表征，结合现代医学手段检测小鼠心脏功能、心肌组织病理学、免疫稳态、血清NT-proBNP及血脂水平，同时进行粪便16S rDNA测序和血清非靶向代谢组学，构建心衰湿证小鼠模型新型评价指标。

心衰湿证组出现明显倦怠、乏力、对外界刺激反应降低以及肛周污秽等表征；心衰组与心衰湿证组均出现明显的心脏功能障碍、心肌损伤、免疫稳态失衡、血清NT-ProBNP水平升高和血脂水平降低，同时上述改变在心衰湿证组更加明显。小鼠粪便16S rDNA测序和血清非靶向代谢组学结果显示，心衰湿证造模后小鼠体内微生物和代谢物出现明显变化，基于LEfSe分析（LDA > 2）发现，Enterorhabdus、Eubacterium、Corynebacterium、Christensenellaceae、Erysipelatoclostridium等5个菌属在心衰湿证组显著富集；代谢组KEGG富集分析显示心衰湿证组差异代谢物主要富集在甘油磷脂代谢、花生四烯酸代谢、胆汁分泌等代谢通路；皮尔森相关性分析结果显示，菌属Eubacterium、Erysipelatoclostridium与主要富集在花生四烯酸代谢上的代谢物16R-HETE、6-keto PGE1、PE-NMe2（16 ∶ 1（9Z）/20 ∶ 3（8Z，11Z，14Z））、Prostaglandin F2a、TXB2、Oxoglutaric acid、12（R）-HETE存在显著的负相关。

主动脉弓缩窄术联合高温高湿环境饲养模拟外湿侵袭成功构建压力超负荷心衰湿证小鼠模型。根据《中医湿证动物模型评价量表》评估心脏功能、血清NT-proBNP、心肌组织病理学、免疫稳态等可作为本模型常规评价指标；在此基础上，引入肠道菌属Eubacterium、Erysipelatoclostridium和花生四烯酸代谢紊乱，构建压力超负荷心衰湿证小鼠模型创新评价体系。

本研究旨在探讨宣肺化浊丸（XuanFei HuaZhuo Pill, XFHZP）对湿热型肺炎（damp-heat pneumonia, DH）作用，并通过蛋白质组学技术揭示其治疗DH的机制，为中医药治疗肺炎提供实验依据。

建立DH大鼠模型，通过体征观察及评分（一般情况、舌、耳、爪甲、尿液、粪便）；肺指数；肺组织苏木素-伊红（HE）染色；肺组织白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定；血细胞计数：白细胞（WBC）、中心粒细胞（Gran）、单核细胞（Mon）、平均血小板体积（MPV）；大鼠肺功能检测呼吸频率（F）和分钟通气量（MV）等，明确XFHZP治理DH的疗效。利用Astral DIA定量蛋白组学技术检测空白对照（control, CON）组、DH组和XFHZP + DH组大鼠的右肺下叶，分析CON组和DH组、DH组和XFHZP + DH组之间的差异表达蛋白（DEPs）。并通过生物信息学进行DEPs的KEGG富集分析。采用免疫组化分析代表性DEPs的表达，采用Western Blot对DEPs及其下游蛋白的表达含量进行检测和验证。

与CON组相比，DH组大鼠出现狂躁、舌色红、耳背血管充盈、尿液色黄及粪便粘滞等症状；肺指数升高，肺组织HE染色出现肺泡壁增厚，炎细胞浸润，肺泡毛细血管充血扩等病变，肺组织中IL-6及TNF-α含量显著升高（P < 0.05），WBC、Gran、Mon、MPV及F显著升高（P < 0.05），MV显著降低（P < 0.05）。与DH组相比，XFHZP + DH组肺指数降低，肺组织HE染色观察到充血情况及肺组织炎性细胞浸润明显减轻，肺组织中IL-6及TNF-α含量显著降低（P < 0.05），WBC、Gran、Mon、MPV及F显著降低（P < 0.05），MV显著升高（P < 0.05）。蛋白质组学分析，表明CON组和DH组大鼠肺组织中有1348个DEPs，DH组和XFHZP + DH组大鼠肺组织中有448个差异蛋白，其中包括AAK1、CACNα1δ1、eIF4E、HSD11β1、ROCK1、TDP1等。DEPs的KEGG通路富集分析显示，cGMP-PKG信号通路和胰岛素信号通路可能是XFHZP治疗DH的关键信号通路。免疫组化结果显示，DH大鼠肺组织中ROCK1和MKNK1的表达均上调，XFHZP治疗后均下调。Western Blot实验进一步表明DH大鼠肺组织中ROCK1和MKNK1的表达均上调，增加了MLC2和eIF4E的磷酸化；XFHZP通过抑制ROCK1和MKNK1的表达，减少MLC2和eIF4E的磷酸化，从而舒张气道平滑肌并抑制炎性因子释放。

XFHZP对DH具有显著的疗效，其作用机制可能通过调控ROCK1和MKNK1的表达，抑制MLC2和eIF4E的磷酸化，进而舒张气道平滑肌并减轻炎症反应。本研究为XFHZP治疗DH提供了分子层面的科学依据，并为中医药治疗肺炎的机制研究提供了新思路。

本研究拟基于新型非酒精性脂肪性肝炎（metabolic dysfunction-associated steatohepatitis, MASH）-肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）小鼠模型（HRAS-HCC），研究伴随非酒精性脂肪肝炎相关的肝癌发生的肾损伤、功能失调、组织学及分子学特征，以探索MASH-HCC诱发肾损伤的潜在机制，旨在为临床研究疾病发生机制及探索诊疗方法提供重要模型工具。

实验采用本课题组自主构建的HRAS-HCC小鼠，以同窝隐性小鼠和野生型C57BL/6小鼠为对照组。5周龄时通过注射他莫西芬诱导小鼠肝组织中HRAS基因表达，进而引发MASH-HCC的发生与进展。在MASH-HCC进展过程中（1 ~ 4周），定期监测小鼠的体质量、精神状态等一般特征，并于选择时间点采集血液样本并检测相关指标；通过苏木素-伊红（HE）和Masson染色分析小鼠肾组织的病变特征。

与HRAS^NON-TAM组相比，HRAS-HCC小鼠在一个月内从MASH阶段，经肝纤维化进展到HCC，表现出黄疸、呼吸急促、弓背、便血、肝肿大和脾肿大等临床症状。4周时，HRAS-HCC小鼠血清中碱性磷酸酶（ALP）降低（P < 0.05），血清尿酸氮（UREA）、尿酸（UA）和肌酐（CREA）升高（P< 0.05）。HE结果显示，HRAS-HCC小鼠肾组织在不同时期存在程度不一的肾小管嗜碱性变、透明性肾小球、肾小管上皮细胞透明滴样变等多种病变。同时，Masson染色观察到HRAS-HCC小鼠肾组织还存在纤维化病变，且肾纤维化（2 ~ 3周）与肝纤维化/肝硬化（2 ~ 3周）的发生时间及严重程度存在相关性。进一步检测肾损伤相关分子表达发现，3周时细胞角蛋白18（KRT18）、SMAD3、纤维连接蛋白1（FN1）、转化生长因子β（TGFβ）在mRNA水平表达升高（P < 0.05）。同时，蛋白质互作网络（PPI）分析结果显示人源HRAS和FN1、SMAD3间存在蛋白互作关系。

本研究结果表明，MASH-HCC引起的肾损伤与肝纤维化程度呈正相关关系，初步展示了MASH-HCC引起的肾损伤病理特征和分子特征，提示HRAS-SMAD3-FN1轴可能存在重要的作用。本研究呈现了特有的MASH-HCC伴随肾损伤动物模型，该模型较真实的重现了临床上肾损伤的疾病特征，为制定该疾病的临床治疗策略奠定了基础。

对YQJ钙锌维生素D维生素K口服液（简称“YQJ”）及其拆方进行体外吸收率和斑马鱼抗骨质疏松功效检测，基于转录组测序术探讨潜在作用机制。

利用Caco-2细胞模拟胃肠道吸收，比较YQJ及其拆方钙离子吸收率。使用地塞米松诱导骨质疏松模型，通过茜素红钙染骨密度及Tg（ola. sp7：nlsGFP）成骨细胞荧光双重验证药效。设置YQJ 250 μg/mL组、MC组和NC组，均3个生物学重复，对斑马鱼进行转录组测序，以|log₂fold-change| ≥ 2、Q value ≤ 0.001严格筛选3组交集的差异基因，进行功能注释和富集分析，筛出YQJ抗骨质疏松基因的表达通路，并进行qPCR验证。

在Caco-2肠屏障体外模型中，YQJ组钙离子吸收率为42.6%，相比为单一柠檬酸钙组吸收率的1.70倍，为柠檬酸钙 + VD₃组、柠檬酸钙 +VK₂组、柠檬酸钙 + CPP组的1.59、1.58、1.56倍，为柠檬酸钙 + 葡萄糖酸锌 + VD₃组的1.33倍，产品YQJ协同促进钙吸收效果显著。YQJ能显著恢复斑马鱼头骨密度、提高成骨荧光强度，且同125 μg/mL浓度下YQJ抗骨质疏松功效较单一柠檬酸钙增加24% ~ 25%。测序结果MC组/NC组、YQJ组/MC组差异基因为340、231个，3组交集58个重叠。对重叠基因进行功能富集，YQJ抗骨质疏松涉及4条通路和11个关键基因。利用qPCR验证，YQJ可明显恢复c3a. 1、cp、coro1a、cldni、bmpr1aa mRNA的表达水平。

YQJ的体外钙吸收率及抗斑马鱼骨质疏松功效均呈现出了协同增效作用，其中抗斑马鱼骨质疏松功效具体指YQJ可增加头骨密度和成骨细胞信号强度。转录组测序发现YQJ主要是通过调节补体和凝血级联反应、铁死亡、吞噬体、氧化应激反应信号通路和其他功能蛋白发挥作用，具体涉及c3a. 1、c3a. 2、c3a. 6、c9、c5、cfb、coro1a、cp、mpx、cldni和bmpr1aa关键基因调控。

构建慢性不可预测轻度约束（chronic unpredictable mild restraint, CUMR）与慢性不可预测节律干预（chronic unpredictable rhythm disturbance, CURD）两种慢性应激相关干眼模型，比较两种模型的表型和代谢组学特征以及与中医证候的关联。

SPF级健康雄性大鼠分为空白组、CUMR组、CURD组，CUMR组每天施加单笼饲养 + 行为约束，CURD组每天施加随机节律干预。造模6周后，筛选出郁证相关干眼大鼠，评估一般情况、行为学、干眼指标；苏木素-伊红（HE）染色观察结膜、角膜、泪腺病理变化；ELISA法检测血清5-羟色胺（5-HT）、皮质醇（cortisol）和角膜组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1β指标水平；超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用系统（UPLC-QTOF-MS）技术进行血清代谢组学分析。

（1）CUMR组和CURD组外观和行为学有显著性差异；（2）CUMR组、CURD组与空白组相比，角膜荧光染色（CFS）显著增加，泪流量（TF）、泪膜破裂时间（BUT）显著减少，且CUMR组改变更为明显；（3）CUMR组、CURD组角膜未见明显炎症细胞浸润。与空白组相比，CUMR组、CURD组结膜杯状细胞数量显著降低、泪腺空泡化面积显著增加，且CUMR组改变更为明显；（4）CUMR组与CURD组ELISA检测比较，CUMR组血清5-HT显著降低，cortisol显著升高、角膜组织TNF-α、IL-1β无统计学意义；（5）血清代谢组学分析提示，CUMR组和CURD组样本中鉴定出235个差异代谢物，呈现显著的分离趋势。

不同的应激造模会影响大鼠代谢，从而造成不同的中医证候和干眼表型。CUMR组表现为“肝郁脾虚型”干眼，其病理进程可能与色氨酸代谢有关；CURD组表现为“肝经郁热型”干眼，其生物学基础可能涉及三羟酸循环。

通过不同剂量不同频次腹腔注射多柔比星（DOX）建立快速衰老小鼠和心脏衰老小鼠模型，优化模型评价指标，为抗衰老药物评价提供疾病模型支撑。

（1）快速衰老小鼠模型：小鼠分为模型1组（5 mg/kg，每7 d 1次）、模型2组（8 mg/kg，每10 d 1次）、模型3组（8 mg/kg，每7 d 1次）、模型4组（10 mg/kg，每10 d 1次）和模型5组（10 mg/kg，每7 d 1次），腹腔注射3次，连续观察60 d，记录小鼠的生存率；（2）心脏衰老小鼠模型：小鼠分为对照组、模型-1组（2 mg/kg）、模型-2组（5 mg/kg）、模型-3组（8 mg/kg）和模型-4组（10 mg/kg），每10 d一次，共注射2次，连续造模30 d，结束后使用小动物高频超声成像技术（UBM）评价射血分数（EF）、缩短分数（FS）和最大血流速度；检测血清中肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、白介素6（IL-6）和白介素1β（IL-1β）的水平；检测心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、琥珀酸脱氢酶（SDH）和过氧化氢酶（CAT）含量；检测心肌组织病理、纤维连接蛋白（FN）、β-半乳糖苷酶染色（β-gal）和p16蛋白等心脏衰老相关指标。

（1）快速衰老小鼠模型：实验期间各个模型组之间小鼠的体质量和存活率均呈显著下降趋势，且随着DOX造模剂量增加和造模间隔时间缩短，体质量和存活率下降愈发明显；（2）心脏衰老小鼠模型：与对照组比较，2、5、8和10 mg/kg DOX可以显著升高LDH含量（P < 0.01），降低GSH-Px活力（P < 0.05或P < 0.01）；5、8和10 mg/kg DOX可以显著降低小鼠体质量（P < 0.01），同时小鼠的EF、FS和最大血流速度均显著降低（P < 0.05或P < 0.01），血清中的IL-6含量显著增加（P < 0.05或P < 0.01），SOD含量显著降低（P < 0.05或P < 0.01），β-半乳糖苷酶和p16蛋白表达显著升高（P < 0.05或P < 0.01），心肌组织出现水样和空泡变性；而8和10 mg/kg DOX还可以显著升高CK-MB水平（P < 0.01）和增加心脏纤维化程度（P < 0.01）；此外，10 mg/kg DOX还可以增加IL-1β和MDA含量（P < 0.01）。

腹腔注射10 mg/kg DOX，每10 d注射一次，共注射3次可以成功建立快速衰老小鼠模型；而腹腔注射5或8 mg/kg DOX，每10 d注射一次，共注射2次可成功建立心脏衰老小鼠模型，引起心功能、心肌酶、炎症、氧化应激、衰老标志物、心脏病理及纤维化的改变，符合心脏衰老的生理病理特点。

本研究旨在探索金银花延缓肾衰老的作用及机制。

采用D-半乳糖（D-gal）腹腔注射构建小鼠肾衰老模型，同时给予金银花水煎液灌胃。行为学实验结束后采集各组小鼠肾组织，进行酶联免疫吸附测定实验（ELISA）和β-半乳糖苷酶染色实验（SA-β-gal）检验造模情况和金银花的作用，然后进行miRNA转录组学和蛋白质组学测序，鉴定出具有统计学意义的差异表达miRNA（DEMs）和差异表达蛋白质（DEPs），并利用GO、KEGG数据库对这些DEMs和DEPs进行功能注释和通路分析。

水迷宫和负重游泳实验结果表明，与对照组相比，模型组小鼠表现出学习记忆能力下降及运动耐力降低等衰老相关特征（P <0.05），金银花干预后，衰老相关特征显著改善（P < 0.05）；ELISA和SA-β-gal染色结果表明，模型组小鼠肾IL-6含量及SA-β-gal染色阳性面积百分比较对照组均显著增加（P < 0.001），金银花干预后，小鼠肾IL-6含量及SA-β-gal染色阳性面积百分比均显著减少（P < 0.01）。通过miRNA转录组学和蛋白质组学筛选出11个显著DEMs和8个显著DEPs，对这些DEMs和DEPs的靶基因进行交集处理后，发现miR-146b-3p/Tmprss13是1对关键互作分子，miR-150-3p/Brpf1、miR-1934-5p/Cln8是两对同时受金银花下调的miRNA和蛋白质。GO和KEGG富集分析结果显示，金银花可能通过激活MAPK通路中具有显著差异表达的基因Lonicera japonica-regulated Ecsit（LjREcsit）来干扰肾衰老进程。

金银花能显著延缓D-gal所诱导的小鼠肾衰老，其机制可能是通过抑制miR-146b-3p进一步激活Tmprss13或下调miR-150-3p/Brpf1、miR-1934-5p/Cln8以延缓肾衰老，LjREcsit介导的MAPK信号通路的调控也是金银花延缓肾衰老的关键。

采用网络药理学与体内实验，探讨补中益气汤（Buzhong Yiqi Decoction, BZYQD）改善化疗肌少症（chemotherapy-induced sarcopenia, CIS）的潜在活性成分及作用机制。

利用TCMSP筛选BZYQD活性成分及靶点；通过GeneCards和OMIM数据库筛选CIS疾病靶点。取药物与疾病交集靶点构建蛋白互作网络，识别核心靶点，进行GO功能注释及KEGG通路富集。利用AutodockTools 1.5.7和PyMOL 2.7.1进行分子对接及可视化处理。通过动物实验验证BZYQD改善CIS的效果。

药物与疾病交集的核心靶点，包括Akt1、TP53、TNF、IL-1β、IL-6等。分子对接核心靶点与主要活性成分大部分具有较好结合能力。在SD大鼠实验中，相较于空白组（C组），模型组（M组）体质量、抓力和力竭游泳时间与肌丝横截面积显著降低，ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量显著升高，Western Blot检测显示，骨骼肌p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著升高，p-Akt/Akt和p-PI3K/PI3K比值显著降低；BZYQD各剂量组大鼠上述指标均有所改善，其中高剂量组（HBYD组）效果最为显著。

BZYQD可能通过调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路改善CIS。